Исследование методом ПЦР в Германии

Сверхчувствительная диагностика в немецких клиниках

Задача  обнаружения  разрозненных  раковых  клеток  в  тканях  различных органов сопоставима даже не с поиском иголки в стоге сена, а с поиском конкретного пучка сена в этом стоге. Поэтому не нужно быть слишком большим пессимистом, чтобы предположить всю «тупиковость» такой ситуации в практике врача-онколога.

Но все изменил метод ПЦР, т.е. полимеразная цепная реакция.

Что такое метод ПЦР?

При любой локализации рака в кровь пациента попадают: а) сами раковые клетки – из стенок мозаичных капилляров узелка из раковых клеток в 1-2 мм в диаметре и б) гены-маркеры из погибших раковых клеток еще задолго до проявления как первичного очага рака, так и его метастазов. Это и позволяет выявлять рак у пациента с самого начала, т.е. с размера узелка в 1-2 мм в диаметре.

Еще в 60-70-х годах XX века Ф. Анкер из Швейцарии сделал первые попытки доказать возможность обнаружения дефектных генов из раковых клеток в крови от пациента. Проф. А.С. Белохвостов еще в 1960 годах XX века обнаружил дефектные гены из раковых клеток яичника и желудка в асцитной жидкости. Он же с коллегами в 1978 году доказал выход дефектных генов из раковых клеток в кровоток из опухолей в эксперименте на животных.

Теперь  дефектные  гены  из  раковых  клеток  обнаруживают  с  помощью ПЦР не только в крови, но и в других выделениях от пациента – мокрота, слюна, слизь, слезная жидкость, моча и др., в зависимости от  типа раковой клетки.

Принципы метода

Раковые клетки разрушаются в тканях за счет апоптоза как клетки с дефектами в геноме, а также Т-клетками. ДНК из них попадает в межклеточную жидкость, а из нее в кровь. В кровь попадают раковые клетки из первичного очага рака и метастазов. В крови они разрушаются, в том числе Т-клетками. Молекулы ДНК и иРНК не могут быть вне клетки, в частности, раковой, а раковая клетка не может быть без ДНК и иРНК. Поэтому выявление этих молекул является эквивалентом обнаружения их носителя – раковой клетки. Точно также по молекулам ДНК, РНК диагностируют вирусы и бактерии – возбудителей различных инфекций у пациентов.

Выявление генов-маркеров раковых клеток в их ДНК является идеальным методом для ранней диагностики рака, контроля лечения и излечения, а также предсказания и диагностики рецидива и метастазов рака у пациентов.

Исследования на урогенитальные инфекции (ПЦР):

• Herpes simplex virus I-II типа;
• HPV HCR - генотипирование (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 52, 56, 58, 59, 66);
• Neisseria gonorrhoeae;
• Gardnerella vaginalis;
• Uraeplasma urealyticum;
• Mycoplasma hominis;
• Mycoplasma genitalium;
• Chlamydia trachomatis;
• Cytomegalovirus.

В особенности опасен в плане развития рака шейки матки вирус папилломы человека (ВПЧ или HPV). Большинство случаев заболевания этой злокачественной опухолью так или иначе связано с инфицированием ВПЧ, которое может протекать бессимптомно.

Проведение диагностики на мочеполовые инфекции помогает своевременно выявить их и пройти соответствующее лечение, а также понять причину существующих проблем с гинекологическим здоровьем женщины.

Не забывайте, что возможные последствия мочеполовых инфекций настолько опасны, что ими не стоит пренебрегать. Скрытая или вялотекущая форма большинства инфекционных заболеваний без явных проявлений, а также безответственное отношение к своему здоровью (отказ от посещения гинеколога) могут привести к тяжелым последствиям!

Все мужчины и женщины без исключения, ведущие активную сексуальную жизнь, должны регулярно проверяться у уролога и гинеколога даже если у них нет никаких проявлений заболевания и обращаться к соответствующему специалисту при появлении жалоб.

Современные диагностические системы позволяют точно определить наличие и активность той или иной урогенитальной инфекции в организме женщины. На основании результатов анализа врач составит оптимальный план лечения.

Преимущества и недостатки метода

Преимущества метода ПЦР:

• для анализа методом ПЦР пригоден абсолютно любой биологический материал;
• специфичность ПЦР равна 100% (при правильном выполнении ПЦР ложноположительный результат невозможен);
• высокая чувствительность (ПЦР позволяет выявить от нескольких копий до одного возбудителя в образце);
• одновременно можно выявить несколько возбудителей в одном образце;
• динамика численности возбудителя заболевания (ПЦР позволяет определять количество копий возбудителя в образце, что позволяет оценить эффективность проводимой терапии);
• процесс полностью автоматизирован и результат ПЦР можно получить через несколько часов после начала исследования.

Недостатки метода ПЦР:

Несмотря на вышеуказанные достоинства метод ПЦР все же не лишен некоторых недостатков, которые следует учитывать при оценке результатов исследований:

Амплифицируется ДНК как живого, так и погибшего микроорганизма. Это налагает определенные требования при использовании ПЦР для контроля эффективности лечения. В общем случае подобный контроль должен проводиться спустя промежуток времени, втечение которого происходит полная элиминация возбудителя. Однако, метод NASBA выявляет РНК только живых микроорганизмов и позволяет избежать этих ограничений.

Высокая чувствительность. Ряд микроорганизмов (условно - патогенная флора, УПФ) в норме может существовать у человека в малом количестве. При помощи метода ПЦР определяются даже самые малые количества УПФ, даже при отсутствии патологии. Однако эта проблема решена с появлением метода количественного определения ДНК.

Различия при использовании разных тест систем. Как говорилось выше, для амплификации можно использовать различные участки генома возбудителя. Однако в случае различных мутации микроорганизмов возможно изменение или утрата генов. Это приводит к разным результатам при использовании тест систем разных производителей.

Контаминация - попадание из внешней среды в реакционную смесь специфических молекул ДНК, способных служить мишенями в реакции амплификации и давать ложноположительные результаты.